FLT3-ITD 基因是 FLT3 基因的一種突變形式，屬于 FMS 樣酪氨酸激酶家族，位于人類 13 號(hào)染色體長(zhǎng)臂（13q22.2）。該基因編碼的蛋白是一種跨膜受體蛋白，屬于 III 型受體酪 氨酸激酶（RTK）家族成員，在造血細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖和分化中發(fā)揮關(guān)鍵作用。

      FLT3-ITD 突變是 FLT3 基因近膜結(jié)構(gòu)域的內(nèi)部串聯(lián)重復(fù)，通常發(fā)生在 14/15 號(hào)外顯子 上，插入的重復(fù)序列長(zhǎng)度一般 3-400 bp 不等，且總是以三倍的倍數(shù)出現(xiàn)，保留轉(zhuǎn)錄本的閱讀框。這種突變導(dǎo)致 FLT3 蛋白在無(wú)配體結(jié)合的情況下發(fā)生二聚體化并持續(xù)自我磷酸化， 增強(qiáng)激活酪氨酸激酶活性，使得下游信號(hào)通路（如 RAS/MAPK、PI3K/AKT 等）持續(xù)激活， 導(dǎo)致細(xì)胞增殖失調(diào)。

      BaF3（小鼠原 B 細(xì)胞）的生長(zhǎng)和增殖需要 IL-3 的維持。通過(guò)引入各種表達(dá)激酶的基因， 能作為 BaF3 的驅(qū)動(dòng)基因，讓 BaF3 不再依賴 IL-3 而增殖，進(jìn)而激酶基因成為 BaF3 增殖依 賴的驅(qū)動(dòng)基因，用于評(píng)估小分子藥物對(duì)激酶的靶向抑制作用，原理及流程見(jiàn)下圖所示。
 

Figure 1. FLT3-ITD[Y842C] BaF3 細(xì)胞的構(gòu)建原理圖

1.WB of FLT3-ITD [Y842C]/BaF3

Figure 1. WB of FLT3-ITD [Y842C]/BaF3.

2. Sanger of FLT3-ITD [Y842C]/BaF3


Figure 3. Sanger of FLT3-ITD [Y842C]/BaF3.
 

3. Anti-proliferation assay

Figure 4. CTG Proliferation Assay of FLT3-ITD [Y842C] BaF3 (C9).